Формирование грануляции нейтрофилов, маркерные реакции
Зернистость нейтрофила представляет систему, обеспечивающую выполнение клетками защитной функции. Механизм формирования цитоплазматических гранул стал ясен только в последние годы, при применении радиоавтографических и ультрацитохимических методов исследования.
Первые зерна появляются в ряду гранулоцитов на стадии промиелоцита и названы азурофильными, а позднее первичными.
Начиная со стадии миелоцита зернистость в клетках гранулоцитарного ряда неоднородна, присутствуют и азурофильные, и специфические гранулы. Специфические гранулы более мелкие, вариабельные по форме зерна, названы вторичными. По мере созревания клетки азурофильная зернистость убывает, а специфическая нарастает. Однако, азурофильные зерна всегда присутствуют (обнаруживаются при электронно-микроскопическом исследовании) и в сегментоядерном гранулоците. Но эти зерна, по-видимому, теряют способность к метахроматическому окрашиванию азуром II и поэтому не видны в световом микроскопе.
Многие годы гематологи считали специфическую зернистость производной от азурофильной. Fedorko, Hirsh, Baggiolini с соавторами, Bainton и другим удалось доказать, что это совершенно самостоятельные популяции гранул, несущие различные наборы ферментов и бактерицидных субстанций и действующие разновременно при переваривании фагоцитированного материала. Для первичных азурофильных гранул маркером признана пероксидаза, для вторичных - щелочная фосфатаза.
Самые первые, «рождающиеся», гранулы выявляются в области пластинчатого комплекса миелобластов. Радиоактивная метка Н3-лизи-ном (при культивировании in vitro клеток костного мозга и последующей радиоавтографии образцов) обнаруживалась последовательно сначала в пластинчатом комплексе, а затем только в гранулах. В промиелоцитах реакция на пероксидазу определялась и в азурофильных гранулах и во всем секреторном аппарате - в эндоплазматическом ретикулуме, цистернах и везикулах пластинчатого комплекса, во всех вновь образующихся гранулах. Новые азурофильные гранулы не образуются после стадии промиелоцита и начиная со стадии миелоцита, пероксидаза выявляется только в гранулах и отсутствует в органеллах секреторного аппарата. В пластинчатом комплексе в этот период формируются специфические гранулы, а число азурофильных гранул редуцируется при каждом митозе. Электронно-микроскопические исследования активности миелопероксидазы и щелочной фосфатазы, проведенные Bainton, не оставляют сомнений в том, что азурофильные гранулы не могут созревать до специфических.
Фракционированием в градиенте сахарозы можно разделить эти два типа гранул. Скорость осаждения азурофильных гранул в 3-4 раза больше, чем у специфических. Средняя плотность азурофильных гранул 1,23, специфических 1,19. Биохимические исследования Baggiolini и Bretz с соавторами показали, что азурофильные гранулы содержат всю пероксидазу, большую часть лизосомальных ферментов и половину лизоцима. Специфические гранулы содержат оставшуюся половину лизоцима и не содержат других компонентов азурофильной зернистости, не содержат щелочной фосфатазы (что опасно развитием аутоиммунных заболеваний, таких как красная волчанка, псориаз и др.). Активность щелочной фосфатазы была обнаружена в мембранной фракции.
По подсчетам разных исследователей, зернистость зрелых гранулоцитов состоит из 10-30% пероксидазоположительных, первичных или азурофильных гранул и 70-90% специфических, вторичных гранул, нелизосомальных, пероксидазоотрицательных. Азурофильные гранулы - сферические, электронно-плотные, размером 5-8 нм, специфические - вариабельной формы, менее электронно-плотные, размером 2-5 нм.
Относительно возможности выделения других типов гранул пока нет единого мнения: их происхождение, состав и функции не вполне ясны. Некоторые авторы выделяют еще две более легкие фракции. В мелких плотных третичных гранулах, или гранулах С, разнообразной формы содержится мукоидное вещество кислой природы и выявляется активность кислой фосфатазы. Микросомальная фракция (или гранулы Д) проявляет небольшую часть клеточной активности щелочной фосфатазы.
Первые зерна появляются в ряду гранулоцитов на стадии промиелоцита и названы азурофильными, а позднее первичными.
Начиная со стадии миелоцита зернистость в клетках гранулоцитарного ряда неоднородна, присутствуют и азурофильные, и специфические гранулы. Специфические гранулы более мелкие, вариабельные по форме зерна, названы вторичными. По мере созревания клетки азурофильная зернистость убывает, а специфическая нарастает. Однако, азурофильные зерна всегда присутствуют (обнаруживаются при электронно-микроскопическом исследовании) и в сегментоядерном гранулоците. Но эти зерна, по-видимому, теряют способность к метахроматическому окрашиванию азуром II и поэтому не видны в световом микроскопе.
Многие годы гематологи считали специфическую зернистость производной от азурофильной. Fedorko, Hirsh, Baggiolini с соавторами, Bainton и другим удалось доказать, что это совершенно самостоятельные популяции гранул, несущие различные наборы ферментов и бактерицидных субстанций и действующие разновременно при переваривании фагоцитированного материала. Для первичных азурофильных гранул маркером признана пероксидаза, для вторичных - щелочная фосфатаза.
Самые первые, «рождающиеся», гранулы выявляются в области пластинчатого комплекса миелобластов. Радиоактивная метка Н3-лизи-ном (при культивировании in vitro клеток костного мозга и последующей радиоавтографии образцов) обнаруживалась последовательно сначала в пластинчатом комплексе, а затем только в гранулах. В промиелоцитах реакция на пероксидазу определялась и в азурофильных гранулах и во всем секреторном аппарате - в эндоплазматическом ретикулуме, цистернах и везикулах пластинчатого комплекса, во всех вновь образующихся гранулах. Новые азурофильные гранулы не образуются после стадии промиелоцита и начиная со стадии миелоцита, пероксидаза выявляется только в гранулах и отсутствует в органеллах секреторного аппарата. В пластинчатом комплексе в этот период формируются специфические гранулы, а число азурофильных гранул редуцируется при каждом митозе. Электронно-микроскопические исследования активности миелопероксидазы и щелочной фосфатазы, проведенные Bainton, не оставляют сомнений в том, что азурофильные гранулы не могут созревать до специфических.
Фракционированием в градиенте сахарозы можно разделить эти два типа гранул. Скорость осаждения азурофильных гранул в 3-4 раза больше, чем у специфических. Средняя плотность азурофильных гранул 1,23, специфических 1,19. Биохимические исследования Baggiolini и Bretz с соавторами показали, что азурофильные гранулы содержат всю пероксидазу, большую часть лизосомальных ферментов и половину лизоцима. Специфические гранулы содержат оставшуюся половину лизоцима и не содержат других компонентов азурофильной зернистости, не содержат щелочной фосфатазы (что опасно развитием аутоиммунных заболеваний, таких как красная волчанка, псориаз и др.). Активность щелочной фосфатазы была обнаружена в мембранной фракции.
По подсчетам разных исследователей, зернистость зрелых гранулоцитов состоит из 10-30% пероксидазоположительных, первичных или азурофильных гранул и 70-90% специфических, вторичных гранул, нелизосомальных, пероксидазоотрицательных. Азурофильные гранулы - сферические, электронно-плотные, размером 5-8 нм, специфические - вариабельной формы, менее электронно-плотные, размером 2-5 нм.
Относительно возможности выделения других типов гранул пока нет единого мнения: их происхождение, состав и функции не вполне ясны. Некоторые авторы выделяют еще две более легкие фракции. В мелких плотных третичных гранулах, или гранулах С, разнообразной формы содержится мукоидное вещество кислой природы и выявляется активность кислой фосфатазы. Микросомальная фракция (или гранулы Д) проявляет небольшую часть клеточной активности щелочной фосфатазы.