Цитохимия клеток гранулоцитарного ряда


Имеются специфические реакции, применение которых позволяет четко дифференцировать клетки гранулоцитарного ряда в нормальных условиях и при патологии. В миелобластах, еще до появления азурофильной зернистости при окраске по Романовскому, определяется активность миелопероксидазы, а также диффузное окрашивание в области выемки ядра Суданом черным Б. Активность нафтол-АБ-Э-хлорацетат эстеразы также выявляется в миелобластах. Эти реакции считаются маркерными для молодых клеток гранулоцитарного ряда. Для зрелых функционально активных нейтрофилов характерно высокое содержание гликогена (ШИК-реакция), фосфолипидов (реакция с Суданом черным Б), активности нафтол-АБ-ГЗ-хлорацетат эстеразы и щелочной фосфатазы.

Одна из немногих цитохимических реакций, получившая достаточно широкое применение в клинической практике, имеющая диагностическую и прогностическую ценность, реакция на щелочную фосфатазу. Щелочная фосфатаза содержится исключительно в зрелых нейтрофилах. В периферической крови активность щелочной фосфатазы значительно выше, чем в клетках костного мозга. Вместе с тем Williams доказывает, что синтез щелочной фосфатазы идет только в незрелых формах и наивысший уровень активности фермента в самых молодых циркулирующих полиморфноядерных гранулоцитах. Поэтому количественное определение активности щелочной фосфатазы - реальный метод изучения возраста лейкоцитов. По мнению Bainton, активность щелочной фосфатазы в зрелых специфических гранулах не выявляется из-за снижения проницаемости их мембран. Биологическое значение этого фермента до конца не выяснено, хотя он выделен даже в очищенном виде.

Литературные данные о норме содержания щелочной фосфатазы в нейтрофилах противоречивы. Средний показатель колеблется от 44 до 76 ед. по Kaplow. У детей в возрасте от 3 до 15 лет активность фермента, по данным А. И. Зивенко, высокая - 80± 1,3 ед., по данным К. М. Мирзаева -94,3±1,8 ед. С возрастом активность фермента снижается.

На активность щелочной фосфатазы влияет гормональный статус. У женщин активность щелочной фосфатазы выше, чем у мужчин и зависит от менструального цикла, минимальная на 2-й и максимальная на 16-й день. Активность фермента повышается при беременности, родах, в послеродовом периоде, а также у новорожденных, особенно на 3-й день жизни, а также в период пищевого лейкоцитоза. Любые стрессовые ситуации (инфаркт миокарда, прободение язвы желудка, операции и т. д.) сопровождаются повышением активности фермента. Активность щелочной фосфатазы повышается при бактериальных инфекциях, сепсисе, пневмонии, хронических тонзиллитах. Вероятно в связи с тем, что при вирусных инфекциях фагоцитарная функция нейтрофилов не имеет существенного значения, активность щелочной фосфатазы уменьшается при этих инфекциях независимо от возбудителя. При инфекционном мононуклеозе активность щелочной фосфатазы нейтрофилов понижена, и этот признак имеет дифференциально-диагностическое значение для исключения бактериальных инфекций.

При полицитемии, остеомиелосклерозе, гипопластической анемии, при лимфоидной форме острого лейкоза активность щелочной фосфатазы повышена. При хроническом миелолейкозе активность фермента в нейтрофилах резко падает, что дает возможность дифференцировать это состояние от лейкемоидных миелоидных реакций. Однако в период бластного криза хронического миелолейкоза активность щелочной фосфатазы сегментоядерных нейтрофилов повышается, а по некоторым данным активность фермента появляется и в 9-16% миелобластов. При остром миелолейкозе в период обострения активность щелочной фосфатазы сегментоядерных низкая, и повышение ее расценивается как благоприятный признак наступления ремиссии.

Определение щелочной фосфатазы нейтрофилов способствует ранней диагностике детской афосфатаземии. Это заболевание относится к ряду энзимопатий, и его клиническая картина напоминает тяжелый рахит, резистентный к проводимой терапии. Определение щелочной фосфатазы позволяет быстро поставить диагноз у новорожденного. При оценке активности щелочной фосфатазы нейтрофилов М. Г. Шубич было предложено, кроме определения цитохимического показателя, названного им ПФАН (показатель фосфатазной активности нейтрофилов), подсчитать ОФАНК - общую фосфатазную активность нейтрофилов крови или фосфатазную мощность крови, умножая ПФАН на число сегментоядерных нейтрофилов в единице объема - в 1 мкл. Таким образом значительно точнее выявляются возможности защитной реакции гранулоцитов.

Кислая фосфатаза (гидролитический лизосомальный фермент) в гранулоцитарном ряду начинает выявляться со стадии миелобласта и достигает максимума в промиелоцитах. По мере дальнейшего созревания клетки активность фермента снижается и отмечается только у части зрелых нейтрофилов. По данным В. В. Соколова с соавторами средняя активность кислой фосфатазы гранулоцитов крови у здоровых людей в возрасте от 30 до 50 лет составляет 24,6±1,7 ед., или 23,4 ±1,4% положительно реагирующих клеток. По данным А. И. Зивенко у детей в возрасте от 3 до 5 лет активность кислой фосфатазы нейтрофилов высокая и составляет 85±1,2 ед.
 
Активность кислой фосфатазы нейтрофилов повышается при воспалении легких, в остром периоде бактериальной инфекции, при активной фазе туберкулеза легких, бронхиальной астме, острых деструктивных процессах в брюшной полости; у больных, страдающих опухолевыми, сосудистыми, воспалительными заболеваниями, заболеваниями центральной нервной системы, с черепно-мозговой травмой в послеоперационном и посттравматическом периодах. Активность фермента в нейтрофилах возрастает при системной красной волчанке, ревматоидном артрите, дерматомиозите, хроническом нефрите, склеродермии, пиелонефрите, ревматизме, в послеоперационном периоде у детей, страдающих хронической пневмонией. Высокая активность кислой фосфатазы в лейкозных клетках отмечается при промиелоцитарном варианте острого лейкоза. При остром миелобластном и хроническом миелолейкозе активность кислой фосфатазы увеличивается в палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилах.

Р. П. Нарциссов с сотрудниками предложили оценивать популяцию клеток всего гранулоцитарного ряда с помощью дифференциальной цитохимической гранулоцитограммы. Для этого анализируется по 50 клеток каждого вида - промиелоцитов, миелоцитов, палочкоядерных, сегментоядерных, например, в реакции на кислую фосфатазу. Подсчитывается процент положительных клеток каждого вида. Структура популяции гранулоцитов в целом вырисовывается по гистограмме. Ускорение созревания гранулоцитов в связи с компенсаторным напряжением лейкопоэза проявляется активацией кислой фосфатазы равномерно на всех стадиях морфологической дифференцировки клеток. И, напротив, замедление дифференцировки на стадии сегментоядерного нейтрофила при почти неизменной структуре популяции более ранних гранулоцитов можно считать патологическим процессом, при котором ядро клетки сегментируется, а зернистость цитоплазмы сохраняет признаки, свойственные незрелой клетке, и содержит активную кислую фосфатазу.

Повышенная активность кислой фосфатазы на разных стадиях созревания гранулоцитов костного мозга у лиц, длительно подвергавшихся воздействию ионизирующей радиации, сопровождается сниженной активностью щелочной фосфатазы в зрелых нейтрофилах костного мозга.

Отношение сегментоядерных нейтрофилов периферической крови, проявляющих активность щелочной фосфатазы к числу сегментоядерных нейтрофилов с положительной реакцией на кислую фосфатазу, у здоровых людей сравнительно постоянно и составляет 1,37. В период обострения воспалительного процесса происходит активация обоих гидролитических ферментов в нейтрофилах, отношение же остается неизменным. Такие изменения отражают функциональную активацию клеток при компенсаторной защитной функции. При наслоении аллергических состояний нормальное отношение нейтрофилов, содержащих щелочную и кислую фосфатазу, изменяется в сторону преобладания клеток с активной кислой фосфатазой.

Нафтол-АБ-Б-хлорацетат эстераза - специфичный фермент для клеток нейтрофильного ряда. В миелобластах активность фермента невысока и выявляется лишь в небольшом проценте клеток. По мере созревания клеток активность фермента возрастает, достигая максимума в промиелоцитах и лишь несколько снижаясь в зрелых нейтрофилах. Зрелые нейтрофилы, по данным Н. А. Рыбаковой, все положительны в реакции на нафтол-АБ-О-хлорацетат эстеразу, по данным Lambers, 10% нейтрофилов отрицательны. Проведение этой реакции помогает в диагностике миелоидной формы острого лейкоза.

Реакция на миелопероксидазу специфична для клеток гранулоцитарного ряда, активность фермента выявляется на всех стадиях созревания параллельно с реакцией на нафтол-AS-Д-хлорацетат эстеразу.

Неспецифическая а-нафтилацетат эстераза, слабо выраженная в миелобластах в диффузном виде и ингибируемая фтористым натрием, достигает максимума в нейтрофильном ряду в промиелоцитах, где почти не ингибируется фтористым натрием. Далее, по мере созревания клетки, активность фермента уменьшается и в зрелых нейтрофилах отсутствует.

ШИК-реакция (на гликоген и другие глюкозамино-гликаны) в миелобластах очень слабая (небольшое диффузное розовое окрашивание в выемке ядра). По мере созревания клеток гранулоцитарного ряда содержание гликогена увеличивается и достигает максимума в зрелых нейтрофилах. В этих клетках гранулы гликогена располагаются так плотно, что создается впечатление интенсивного диффузного окрашивания цитоплазмы.

Реакция на липиды (с Суданом черным Б) специфична для клеток гранулоцитарного ряда. Реакция начинает проявляться в миелобласте в виде черного окрашенного пятна в зоне выемки ядра, возрастает в промиелоцитах и достигает максимума в зрелых нейтрофилах, цитоплазма которых выглядит совершенно черной.

Активность некоторых дегидрогеназ в зрелых нейтрофилах, в норме выраженная средним числом гранул формазана в одной клетке, составляет по В. В. Соколову с соавторами 5,78 - для митохондриальной а-глицерофосфатдегидрогеназы, 2,06 - для гиалоплазматической, 3,37 - для сукцинатдегидрогеназы, 2,58 - для лактатдегидрогеназы.



Гость, 05.06.2011 22:14:27
В нашей деревне не то, что цитохимию, на СОЭ кровь не сдашь - лаборатория за 40 км...
Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: