Изучение инфекционной аллергии при экспериментальной стрептококковой инфекции


Для иммунологической характеристики развивающегося инфекционного процесса и, в частности, для анализа специфической сенсибилизации организма представляется существенным изучение формирования иммунных комплексов. В соответствии с этим перед настоящей работой была поставлена задача проследить за образованием комплексов антиген - антитела при различном течении экспериментальной стрептококковой инфекции и изучить сенсибилизирующие и иммуногенные свойства образующихся иммунных комплексов.

Опыты проводились на кроликах и белых мышах. Заражение кроликов культурой гемолитического стрептококка производилось в зависимости от задач опыта внутрикожно или путем введения микробной взвеси в кровь внутривенно. Для внутрикожного заражения применяли молодую (6-часовую) вирулентную культуру I серотипа группы А, выращенную на сывороточном бульоне. Кроликам вводили 300-400 тысяч жизнеспособных микробов, для чего было сделано 5 внутрикожных инъекций по 0,2 мл культуры каждая. Для внутривенного заражения кроликов применяли слабовирулентную лабораторную культуру стрептококка 12-го серотипа в дозе 20-40 млн. микробов. Из литературных данных следовало, что в этом случае подавляющая часть микробов отмирает, но незначительная часть сохраняется, а затем и размножается в почках, что приводит к формированию в этом органе микробных очагов.

Сыворотки, полученные от подопытных животных в разные сроки, исследовались на содержание в них иммунного комплекса, показателем чего служила их токсичность для адреналэктомированных мышей. Для этого сыворотки разводили дистиллированной водой 1 : 10 и через раствор пропускали ток углекислоты. Выпадавший осадок отделяли центрифугированием и растворяли в физиологическом растворе, взятом в количестве, равном исходному объему сыворотки. Мышам вводили 0,3 мл полученного раствора внутривенно.

Помимо этого, все сыворотки исследовали на присутствие стрептококкового антигена и стрептококковых антител. Исследования производили посредством реакции связывания комплемента по принятым в отделе микробиологии Института экспериментальной медицины методикам (длительное связывание комплемента при низкой температуре с одной, полуторной и двойной его дозами); использовали групповой полисахаридный антиген для обнаружения антител и стрептококковую иммунную сыворотку высокого титра для выявления антигена.

Сенсибилизирующие свойства иммунных комплексов определяли в опыте на мышах. Препараты, полученные по описанной выше методике, вводили мышам внутрибрюшинно по 0,4 мл дважды с промежутком в 4 дня. Через 10-12 дней после второй сенсибилизирующей инъекции у животных удаляли надпочечники и спустя 2-3 дня производили "разрядку", вводя внутривенно разные дозы полисахаридного антигена, приготовленного из культуры стрептококка 12-го серотипа. Результаты оценивали по числу мышей, павших от острого анафилактического шока. Приводим результаты проведенных опытов.

Исследование сывороток, полученных от кроликов, зараженных внутрикожно вирулентной культурой стрептококка. Всего было заражено внутрикожно вирулентной культурой гемолитического стрептококка I серотипа 11 кроликов, 5 из них погибли в первые три дня после заражения от стрептококкового сепсиса и были исключены из опыта. Дальнейшие наблюдения проводились в отношении остальных 6 кроликов, у которых в течение первой недели отмечались признаки тяжелого заболевания и интоксикации. Из них на 8-й день после заражения пал еще 1 кролик, у остальных животных отмечалось постепенное улучшение состояния. В течение 5 недель, начиная с первых дней после заражения, у подопытных кроликов брали пробы крови с промежутками в 2-5 дней. Суммарные результаты серологических исследований представлены в табл. 20 (иммунная сыворотка для обнаружения стрептококкового антигена была разведена 1 : 20, полисахаридный антиген для обнаружения стрептококковых антител - 1 : 1000).

Как видно из результатов опыта, наиболее токсичными оказались сыворотки, полученные на 1-2-й неделях после заражения (23 из 27); в дальнейшем число токсичных проб убывало и они составили лишь половину общего числа проб, взятых на 3-4-й неделях, а на 5-й неделе токсичной оказалась всего 1 проба из 6. Из 47 проб гибель части адреналэктомированных мышей вызывали 32, т. е. примерно 2/3. Вместе с тем из данных, приведенных в последней колонке табл. 21, можно видеть, что и процент павших мышей снижался с 46-51% в опытах с пробами, взятыми на 1-3-й неделях после заражения, до 26% с более поздними пробами, а из 24 мышей, которым введи сыворотки, полученные на 5-й неделе, пала лишь одна. Всего из 217 мышей погибли в опытах 88, т. е. 40%.

Изучение сенсибилизирующих и иммуногенных свойств комплексов антиген-антитело. Для изучения указанного вопроса была использована модель очагового стрептококкового процесса, развивающегося у кроликов при внутривенном заражении большой дозой слабовирулентной культуры гемолитического стрептококка 12-го серотипа. Исследовались 17 сывороток от 17 кроликов, которые были заражены дозой в 40-80 млн. клеток. Оказалось, что 8 сывороток, взятых в сроки от 10-го до 28-го дня после заражения, дали положительный или слабоположительный результат при испытании на мышах, лишенных надпочечников; введение препаратов, полученных из этих сывороток по описанной выше методике, вызвало гибель 12 из 32 подопытных мышей (каждая сыворотка испытывалась на 4 мышах). Сыворотки, полученные от зараженных кроликов раньше 10-го или позже 28-го дня, оказались нетоксичными для адреналэктомированных мышей: из 36 мышей, получивших препараты, не пала ни одна. Полученные результаты давали основание предполагать присутствие иммунных комплексов в сыворотках первой группы. Из них были отобраны 5 сывороток, различавшихся по степени токсичности для адреналэктомированных мышей. Они были разведены дистиллированной водой в отношении 1 : 10 и подвергнуты действию тока углекислоты; выпавшие осадки были отделены и растворены в физиологическом растворе в соответствии со взятым объемом сыворотки. Контрольные препараты были приготовлены таким же путем из кроличьих сывороток, которые не были токсичными для адреналэктомированных мышей, а также из сыворотки здорового кролика, в которую предварительно был добавлен полисахаридный стрептококковый антиген. Полученными препаратами были сенсибилизированы по указанной выше методике отдельные группы мышей (по 15-18 животных в группе). Спустя 12 дней у всех животных были удалены надпочечники, а еще через 2 дня им внутривенно ввели полисахаридный стрептококковый антиген в дозах от 0,125 до 1 мг.

Результаты проведенных опытов указывали, что, используя в качестве экспериментальной модели адреналэктомированных мышей, удалось констатировать присутствие комплексов антиген-антитело в крови животных, зараженных гемолитическим стрептококком. Заслуживает внимания то обстоятельство, что это удавалось в отношении процессов, которые различались по методам воспроизведения, по свойствам использованной культуры, по характеру экспериментальной инфекции и по ее течению. Токсичными для адреналэктомированных мышей оказались сыворотки кроликов с развивающейся общей инфекцией, вызванной внутрикожным заражением вирулентной стрептококковой культурой, а также сыворотки от кроликов, внутривенное введение которым слабовирулентной культуры приводило к формированию местных очагов в почках. При этом в первом случае токсичность сывороток заметно снижалась по прошествии 3 недель от начала процесса и не проявлялась вовсе в более поздние сроки. Это в достаточной степени соответствовало серологическим данным. Вместе с тем надо указать, что отмечались заметные различия в действии сывороток от разных кроликов (зараженных одинаковым образом) на адреналэктомированных мышей. Так, токсические свойства сывороток проявлялись на первой неделе после заражения у всех кроликов, но сохранялись у одних дольше (до 4 недель), а у других это свойство исчезало скорее. На 2-3-й неделях исследование проб, взятых у одного и того же кролика в разные дни, давало непостоянные результаты: токсичные сыворотки сменялись сыворотками, не вызывавшими вовсе гибели адреналэктомированных мышей, а затем токсичная сыворотка появлялась вновь. Отражало ли это волнообразное течение в развитии процесса, осталось пока невыясненным. Нельзя было также установить для каждого кролика отчетливой корреляции между активностью взятых у него проб сыворотки в опытах на мышах и серологическими данными (опыт внутрикожного заражения кроликов). Надо, однако, подчеркнуть, что на суммарном материале индивидуальные колебания и особенности сглаживались и общие результаты представлялись достаточно закономерными. Как приводилось выше, сыворотки от кроликов с очаговой стрептококковой инфекцией могли сенсибилизировать мышей к последующему введению стрептококкового антигена. То обстоятельство, что при этом отмечалась достаточная корреляция между сенсибилизирующими свойствами одной или другой пробы и ее токсическим воздействием на адреналэктомированных мышей, может служить подтверждением, что последнее можно отнести за счет иммунного комплекса.

На основании приведенных опытов можно сделать следующие выводы:

1. На двух экспериментальных моделях, различавшихся по свойствам возбудителя, методам воспроизведения инфекционного процесса, по его характеру и течению, удалось установить присутствие стрептококкового иммунного комплекса в крови зараженных животных и проследить динамику его накопления и убывания.

2. Сыворотки зараженных животных сенсибилизировали мышей к последующему введению стрептококкового полисахаридного антигена. Отмечалось достаточное соответствие между сенсибилизирующими свойствами сывороток и присутствием в них иммунного комплекса, устанавливаемого по токсичности сывороток для адреналэктомированных мышей.



Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: