Иммуноглобулины из крови человека
Эти препараты относятся к числу гомологичных, так как изготовляются из венозной крови доноров, абортной и плацентарной крови. Наиболее широко используется так называемый нормальный иммуноглобулин, который применяют для профилактики вирусного гепатита А, кори и ряда других заболеваний. Специфические иммуноглобулины направленного действия (противостолбнячный, противооспенный, противогриппозный, против клещевого энцефалита, противостафилококковый) получают только из крови доноров, как правило, предварительно привитых соответствующими вакцинными препаратами. При этом технология производства нормального и специфических иммуноглобулинов идентична.
Исходное сырье для получения гамма-глобулина собирают, хранят и транспортируют в производственные предприятия с соблюдением ряда требований, регламентированных специальной инструкцией. Выделение иммуноглобулина в нашей стране и за рубежом осуществляется в основном с помощью одной из модификаций метода, разработанного П. Коном с соавт., который основан на фракционировании сывороточных белков с помощью этилового спирта при температуре ниже нуля. Варьируя концентрацией спирта (от 8 до 26%), значениями рН (от 5 до 7,4), ионной силой (от 0,01 до 0,07) и температурой (от -2 до - 7°С), за несколько циклов (стадий) удается освободить сыворотку от балластных белков и в конечном итоге получить практически чистую фракцию иммуноглобулина, которую после лиофилизации растворяют до 10% концентрации, осветляют и стерилизуют фильтрацией, разливают по ампулам и контролируют. При этом вначале в осадок переводят остатки фибриногена, слизь и нерастворимые примеси, затем осаждают всю гамма-глобулиновую фракцию с примесями альфа- и бета-глобулинов, из ресуспендированного осадка отделяют осаждаемые альфа- и бета-глобулины, получая раствор практически чистой гамма-глобулиновой фракции. Последнюю переводят в осадок, лиофилизируют, разводят до 10% концентрации, а затем окончательно очищают и стерилизуют путем последовательной фильтрации через осветляющие и стерилизующие пластины или миллипоровые фильтры. Все стадии фракционирования проходят в реакторах, а отделение осажденных фракций - в суперцентрифугах.
При контроле препаратов гамма-глобулина исследуют:
- физические свойства (опалесцирующий раствор не должен содержать осадка, хлопьев и посторонних включений);
- содержание белка (должно быть не менее 10- 17% специфических Ig);
- рН (должен быть в пределах 6,6-7,4);
- содержание спирта (не должен определяться);
- стерильность (в посевах на разные питательные среды не должно быть роста микробов);
- стабильность (препарат должен оставаться жидким, не переходя в состояние геля после выдерживания при 56°С в течение 4 ч);
- степень очистки (фракция гамма-глобулинов должна составлять не менее 97% общего белка);
- безвредность (белые мыши и морские свинки, получившие подкожно соответственно по 0,5 и 5 мл препарата, должны оставаться здоровыми в течение 7 дней наблюдения);
- пирогенность (у здоровых кроликов, получивших препарат внутривенно из расчета 1,5 мл на 1 кг массы тела, температура в прямой кишке не должна повышаться более чем на 0,6°С в течение первых 3 ч);
- степень концентрации антител (концентрация антител против вируса кори в препарате по сравнению с их титром в исходном сырье должна повыситься не менее чем в 6 раз).
Естественно, в препаратах направленного действия определяют "содержание специфических антител. Так, в 1 мл противогриппозного иммуноглобулина титр антигемагглютинииов к вирусу типа А2 и В должен быть соответственно не ниже чем 1:400 и 1:1600, в 1 мл противооспенного иммуноглобулина титр вируснейтрализующих антител должен быть не ниже 1:4000; в 1 мл антистафилококкового иммуноглобулина должно быть не менее 20 ME антиальфастафилолизина.
Если результаты контрольных исследований удовлетворяют перечисленным требованиям, иммуноглобулин используют для прививок.
Препараты гамма-глобулина вводят внутримышечно шприцем или с помощью безыгольного инъектора в дозах, указанных в наставлениях по их применению. В последние годы в нашей стране и ряде зарубежных стран производят препараты иммуноглобулина для внутривенного введения, антикомплементарная активность которых, связанная с агрегацией молекул IgG, устраняется путем кислотно-ферментативного гидролиза пепсином при рН 3,9-4 с последующей сорбцией фермента на гидроокиси алюминия и удаления комплекса гидроокись-пепсин с помощью осветляющей фильтрации.
Срок годности препаратов иммуноглобулина для внутримышечного введения при условии их правильной транспортировки и хранения в сухом затемненном месте при 2-10°С 2 года, а препарата для внутривенного введения - 1 год.
Как подчеркивалось ранее, иммуноглобулин получил высокую оценку как эффективное средство профилактики кори, предупреждающее возникновение болезни при введении не болевшим ранее и непривитым высоко восприимчивым детям в дозе 3 мл препарата не позднее 6-го дня после контакта с больным корью. Несомненно, эффективно применение иммуноглобулина при профилактике вирусного гепатита А, когда его вводят незадолго до начала сезонного подъема заболеваемости дошкольникам и ученикам 1-4-х классов в дозе 1 мл, а также детям, общавшимся с заболевшим в эпидемических очагах вирусного гепатита. Следует отметить, что за рубежом практикуют применение более концентрированных препаратов иммуноглобулина, причем в значительно больших дозах, вводя препарат из расчета 0,02-0,12 мл 16% препарата на 1 кг массы тела. При этом прививают только восприимчивых детей и взрослых, общавшихся с больным вирусным гепатитом в эпидемических очагах этой инфекции.
Установлена профилактическая эффективность противогриппозного иммуноглобулина, которая несомненно присуща в той или иной степени и другим препаратам иммуноглобулина направленного действия в случае их своевременного введения в ранние сроки после инфицирования. Однако эти препараты применяют в основном для лечения больных тяжело протекающими формами соответствующих инфекционных болезней, зачастую сопровождающихся развитием разных осложнений.
Исходное сырье для получения гамма-глобулина собирают, хранят и транспортируют в производственные предприятия с соблюдением ряда требований, регламентированных специальной инструкцией. Выделение иммуноглобулина в нашей стране и за рубежом осуществляется в основном с помощью одной из модификаций метода, разработанного П. Коном с соавт., который основан на фракционировании сывороточных белков с помощью этилового спирта при температуре ниже нуля. Варьируя концентрацией спирта (от 8 до 26%), значениями рН (от 5 до 7,4), ионной силой (от 0,01 до 0,07) и температурой (от -2 до - 7°С), за несколько циклов (стадий) удается освободить сыворотку от балластных белков и в конечном итоге получить практически чистую фракцию иммуноглобулина, которую после лиофилизации растворяют до 10% концентрации, осветляют и стерилизуют фильтрацией, разливают по ампулам и контролируют. При этом вначале в осадок переводят остатки фибриногена, слизь и нерастворимые примеси, затем осаждают всю гамма-глобулиновую фракцию с примесями альфа- и бета-глобулинов, из ресуспендированного осадка отделяют осаждаемые альфа- и бета-глобулины, получая раствор практически чистой гамма-глобулиновой фракции. Последнюю переводят в осадок, лиофилизируют, разводят до 10% концентрации, а затем окончательно очищают и стерилизуют путем последовательной фильтрации через осветляющие и стерилизующие пластины или миллипоровые фильтры. Все стадии фракционирования проходят в реакторах, а отделение осажденных фракций - в суперцентрифугах.
При контроле препаратов гамма-глобулина исследуют:
- физические свойства (опалесцирующий раствор не должен содержать осадка, хлопьев и посторонних включений);
- содержание белка (должно быть не менее 10- 17% специфических Ig);
- рН (должен быть в пределах 6,6-7,4);
- содержание спирта (не должен определяться);
- стерильность (в посевах на разные питательные среды не должно быть роста микробов);
- стабильность (препарат должен оставаться жидким, не переходя в состояние геля после выдерживания при 56°С в течение 4 ч);
- степень очистки (фракция гамма-глобулинов должна составлять не менее 97% общего белка);
- безвредность (белые мыши и морские свинки, получившие подкожно соответственно по 0,5 и 5 мл препарата, должны оставаться здоровыми в течение 7 дней наблюдения);
- пирогенность (у здоровых кроликов, получивших препарат внутривенно из расчета 1,5 мл на 1 кг массы тела, температура в прямой кишке не должна повышаться более чем на 0,6°С в течение первых 3 ч);
- степень концентрации антител (концентрация антител против вируса кори в препарате по сравнению с их титром в исходном сырье должна повыситься не менее чем в 6 раз).
Естественно, в препаратах направленного действия определяют "содержание специфических антител. Так, в 1 мл противогриппозного иммуноглобулина титр антигемагглютинииов к вирусу типа А2 и В должен быть соответственно не ниже чем 1:400 и 1:1600, в 1 мл противооспенного иммуноглобулина титр вируснейтрализующих антител должен быть не ниже 1:4000; в 1 мл антистафилококкового иммуноглобулина должно быть не менее 20 ME антиальфастафилолизина.
Если результаты контрольных исследований удовлетворяют перечисленным требованиям, иммуноглобулин используют для прививок.
Препараты гамма-глобулина вводят внутримышечно шприцем или с помощью безыгольного инъектора в дозах, указанных в наставлениях по их применению. В последние годы в нашей стране и ряде зарубежных стран производят препараты иммуноглобулина для внутривенного введения, антикомплементарная активность которых, связанная с агрегацией молекул IgG, устраняется путем кислотно-ферментативного гидролиза пепсином при рН 3,9-4 с последующей сорбцией фермента на гидроокиси алюминия и удаления комплекса гидроокись-пепсин с помощью осветляющей фильтрации.
Срок годности препаратов иммуноглобулина для внутримышечного введения при условии их правильной транспортировки и хранения в сухом затемненном месте при 2-10°С 2 года, а препарата для внутривенного введения - 1 год.
Как подчеркивалось ранее, иммуноглобулин получил высокую оценку как эффективное средство профилактики кори, предупреждающее возникновение болезни при введении не болевшим ранее и непривитым высоко восприимчивым детям в дозе 3 мл препарата не позднее 6-го дня после контакта с больным корью. Несомненно, эффективно применение иммуноглобулина при профилактике вирусного гепатита А, когда его вводят незадолго до начала сезонного подъема заболеваемости дошкольникам и ученикам 1-4-х классов в дозе 1 мл, а также детям, общавшимся с заболевшим в эпидемических очагах вирусного гепатита. Следует отметить, что за рубежом практикуют применение более концентрированных препаратов иммуноглобулина, причем в значительно больших дозах, вводя препарат из расчета 0,02-0,12 мл 16% препарата на 1 кг массы тела. При этом прививают только восприимчивых детей и взрослых, общавшихся с больным вирусным гепатитом в эпидемических очагах этой инфекции.
Установлена профилактическая эффективность противогриппозного иммуноглобулина, которая несомненно присуща в той или иной степени и другим препаратам иммуноглобулина направленного действия в случае их своевременного введения в ранние сроки после инфицирования. Однако эти препараты применяют в основном для лечения больных тяжело протекающими формами соответствующих инфекционных болезней, зачастую сопровождающихся развитием разных осложнений.