Цитохимия лимфоцитов


Среди цитохимических реакций маркерными для лимфоидных клеток считаются отрицательная реакция с Суданом черным Б, отсутствие активности миелопероксидазы, а также положительная ШИК-реакция части лимфоидных клеток. Своеобразие распределения продукта ШИК-ре-акции в лимфоцитах в виде четких гранул, располагающихся по контуру ядра в цитоплазме, в противоположность диффузной ШИК-реакции в клетках гранулоцитопоэза, сделало этот тест маркерным при дифференциальной диагностике лимфоиролиферативных состояний от миелопролиферативных, хотя лимфоидные клетки относительно бедны полисахаридами.

У детей в периферической крови выявляются до 5% лимфоцитов с ШИК-положительной реакцией в виде множественных гранул, окаймляющих ядро, и 10-15% лимфоцитов с единичными ШИК-положительными гранулами.

Гидролитические ферменты - кислая фосфатаза и а-нафтилацетат эстераза катализируют разрушение различных метаболитов и антигенов в клетке. Активность а-нафтилацетат эстеразы, определяемая методом азосочетания с применением синего прочного В, проявляется в лимфоидных клетках чаще в виде 1-3 крупных гранул в цитоплазме, а также слабого диффузного окрашивания. Вероятнее всего в виде гранул проявляется лизосомальная активность фермента, в диффузном виде - активность микросомальной фракции клеток. Диффузная а-нафтилацетат эстераза тормозится NaF, а гранулярная - резистентна к действию ингибитора в стандартной концентрации 1,5 мг/мл.

В лимфоцитах преобладает гранулярная а-нафтилацетат эстераза. В периферической крови детей разных возрастов активность фермента колеблется: от 40 до 60% лимфоцитов содержат гранулы. Среди лимфоидных клеток лимфатических узлов при реактивных лимфаденитах 30-40% положительных, в стернальном пунктате здорового ребенка, по нашим данным, 20-40% положительных лимфоцитов.

Активность кислой фосфатазы, выявляемая методом азосочетания в модификации Р. П. Нарциссова, в лимфоцитах периферической крови здоровых людей, по данным различных авторов, колеблется. Положительные клетки составляют от 26% до 80%. Реакция, как правило, по степени интенсивности мило меняется в положительных клетках, и поэтому коэффициент по Kaplow численно совпадает с процентом положительных лимфоцитов.

Продукт цитохимических реакций выявления гидролитических ферментов в лимфоцитах постоянно обнаруживается преимущественно в виде 1-3 отчетливых гранул на слабо диффузном фоне. Такое постоянство в проявлении реакций дает основание пользоваться ими для определения лимфоидных клеток при патологических состояниях. Активность а-нафтилацетат эстеразы в лимфоцитах коррелирует с активностью кислой фосфатазы, но первая является значительно менее лабильным ферментом, что было показано Н. А. Рыбаковой.

Повышение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах обнаружено при экземе, бронхиальной астме, рахите, вакцинации против кори, оспы, полиомиелита. Существенное снижение процента эстеразоположительных лимфоцитов наблюдается при ХЛЛ и некоторых других лимфопролиферативных заболеваниях.

Лимфоцит циркулирующего пула относительно богат окислительно-восстановительными ферментами. Это клетка преимущественно с аэробным типом обмена. Среди большого количества дегидрогеназ, изучаемых цитохимическими методами, наибольшую популярность приобрели реакции на СДГ, ЛДГ, а-ГФДМ, а-ГФДГ, Г-6-ФДГ, И-5-МФД, ДОД.

Известно, что энзиматическая активность лимфоцитов изменяется при иммунизации в эксперименте и после вакцинации у детей. Как правило, увеличивается активность кислой фосфатазы и СДГ. Если же наблюдается большая степень увеличения активности кислой фосфатазы, нежели СДГ, в течение поствакцинального периода могут возникнуть осложнения. При высоких значениях активности кислой фосфатазы в лимфоцитах периферической крови до прививок вероятность развития осложнений увеличивается. Так, ферментный статус лимфоцита позволяет прогнозировать возможность осложнений в течение того или иного процесса. В частности, степень активности НАДФ-Н2-диафоразы определяет течение токсико-инфекционного процесса.

Кроме уже описанных изменений ферментного профиля лимфоцитов после вакцинации, продолжающихся не более 2 недель, нами отмечено увеличение в крови содержания ШИК-положительных лимфоцитов до 20-30% (реакция в виде венчиков из гранул), сохраняющееся на протяжении более 2 мес. от момента вакцинации.

Диссоциация энергетических и катаболических процессов в лимфоцитах - увеличение активности кислой фосфатазы при снижении активности ряда дегидрогеназ - может быть цитохимическим критерием гиперчувствительности замедленного типа в период ее максимальной выраженности.

Подобная диссоциация энергетических процессов и процессов катаболизма в лимфоцитах периферической крови наблюдается при ревматизме у детей, системной красной волчанке у взрослых людей, хроническом описторхозе, нефритическом синдроме, развившемся на фоне обычного гломерулонефрита или волчаночного нефрита [138], у детей с бронхиальной астмой. Эти данные информируют о реакции по типу гиперчувствительности замедленного типа и помогают в дифференциальной диагностике перечисленных состояний.

Уже на первых этапах взаимодействия с антигеном изменяется ферментный статус лимфоцита. Процесс детально изучен в нашей лаборатории при краткосрочном культивировании лимфоцитов периферической крови в присутствии ФГА. Трансформация лимфоцитов в иммунобласты сопровождается усилением процессов гликолиза, реакций пентозного цикла, цикла Кребса, катаболических процессов. Интересно, что кроме количественных изменений наблюдается иной характер распределения продукта реакций. Кислая фосфатаза и а-нафтилацетат эстераза выявляются в виде интенсивного диффузного окрашивания, ШИК-положительный материал также в виде диффузного розового пятна в выемке ядра.

В ряде работ, выполненных под руководством доктора медицинских наук Р. П. Нарциссова, выявлены многочисленные корреляционные связи активности ферментов лимфоцитов и напряженности обменных процессов в печени, почках, сердце, тимусе, аппендиксе и селезенке. Так при развитии гипоксии различного генеза у детей наблюдается корреляция активности дегидрогеназ лимфоцитов с ферментами миокарда, а также с показателями газового состава крови и кислотно-щелочного равновесия. Депрессия а-ГФДМ и СДГ при рахите наблюдается не только в лимфоците, но и в печени, почках и кишечнике. При гипертиреозе обнаружена прочная корреляционная связь ферментной активности циркулирующих лимфоцитов с уровнем дегидрогеназ мышечной и тиреоидной ткани, а также с изменением показателей основного обмена. Так, по мнению Р. П. Нарциссова, лимфоцит служит своеобразным ферментным «зеркалом» многих тканей.



Ваше имя:
Защита от автоматических сообщений:
Защита от автоматических сообщений Символы на картинке: